流式細胞術在日常實驗中經常被用到，以流式細胞儀為工具，通過多種熒光標記的抗體以及熒光染料對細胞進行多參數(shù)分析，其強大的信息收集和處理能力，可以為研究人員呈現(xiàn)豐富而全面的細胞信息。

目前，流式細胞分析儀已經從只能同時檢測幾個參數(shù)發(fā)展到可以同時檢測幾十個參數(shù)，比如最新的全光譜流式細胞儀系統(tǒng)已經可實現(xiàn)同時40色的多色分析。為了滿足大家的需求，BioLegend公司也發(fā)布了用于全光譜流式細胞儀的新熒光，包括SparkBlue?550和Spark NIR?685。下面我們就一起來學習一下這兩種新熒光吧！

一、SparkBlue?550

Spark Blue?550被488nm藍色激光激發(fā)并在550nm處發(fā)射，介于AlexaFluor^?488或FITC和PE的峰值發(fā)射之間。SparkBlue?550的亮度與FITC相當。405nm紫外激光可以進一步增加這幾種熒光不互相混合的情況。

（一）Spark Blue?550可與FITC和PE抗體區(qū)別開

使用抗CD19-Spark Blue?550與CD4-BV570?、CD38-PE以及CD40-FITC等不同組合抗體對人全血進行染色。圖中數(shù)據(jù)均來至于淋巴細胞門。結果可以看出SparkBlue?550可以完全與FITC和PE熒光區(qū)別開，該數(shù)據(jù)使用Cytek?Aurora流式儀檢測。

（二）Spark Blue?550染色的一致性和有效性

用抗CD4和抗CD19的不同熒光抗體組合對人全血染色，結果顯示Spark Blue?550染色具有有效性以及和其他常見熒光PE、AF647相比染色后相應群體比例也具有一致性。

二、Spark NIR? 685

由于近紅外（NIR）范圍內的熒光發(fā)射光譜以及光電倍增管（PMT）對800nm以上發(fā)射波長的不敏感性，633nm紅色激光器僅限于2-3個熒光。借助全光譜流式細胞儀，APC和AlexaFluor?700的發(fā)射峰之間的光譜間隙可檢測Spark NIR?685等新型熒光。Spark NIR?685可被633 nm激發(fā)，最大發(fā)射波長為685 nm，與FITC具有相似的亮度。

（一）使用Spark NIR?685熒光來擴展配色方案

來自相同供體的全血用圖A或B配色方案染色。圖A包括抗人CD4-FITC、CD19-Alexa Fluor700、CD8-PacificBlue ^TM、CD3-PE以及CD56-PE-Cy7的抗體。圖B包括抗人CD4-Spark NIR ^TM685、CD19-AlexaFluor 700、CD8-APC-Fire^TM 750、CD3-PE以及CD56-APC的抗體。

三、以3激光的Aurora全光譜流式細胞儀為例，以下是其熒光通道

四、在我們的幫助下完善多色配色方案

隨著流式細胞術多色配色中參數(shù)的數(shù)量不斷增加，多色配色變得越來越困難。如果您需要幫助，請與我們的技術支持團隊聯(lián)系，發(fā)送郵件至tech_immumo@dakewe.net。

*備注：Brilliant Violet?是Sirigen Group 的商標。AlexaFluor^?和Pacific Blue?是Thermo Fisher Scientific及其子公司的注冊商標。Cytek?是Cytek Biosciences的商標。Spark Blue?和Spark NIR?是BioLegend的商標。